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    丙酸蛛網菌PCR檢測試劑盒實驗方法步驟

    點擊次數:1060  更新時間:2020-11-18

    丙酸蛛網菌PCR檢測試劑盒實驗方法步驟:
    方法
    1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
    10×PCR buffer                   
    5 μl     dNTP mix (2mM)             
    4 μl     引物1(10pM)                 
    2 μl     引物2(10pM)                 
    2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
    1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl) 
    1 μl      加ddH2O至 50 μl 
    視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
    2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
    3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
    4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。

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